組織細(xì)胞中的大多數(shù)肽類激素、蛋白物質(zhì)為水溶性,在進(jìn)行病理研究之前必需固定。多聚甲醛能很好地保存組織的抗原性和細(xì)微結(jié)構(gòu),與福爾馬林相比更適用于小動物組織標(biāo)本的固定,也非常適合組織和細(xì)胞的光鏡病理或免疫化學(xué)研究。組織細(xì)胞固定液為4%多聚甲醛的緩沖溶液,pH為中性。用于組織和細(xì)胞標(biāo)本的固定。.
組織細(xì)胞固定液固定方法有物理固定和化學(xué)固定兩類,物理固定可采用空氣干燥(血涂片)、驟冷(在液氮中迅速冷凍)或微波固定等;化學(xué)固定有浸潤法(immersion method)和灌流法(perfusion method)。灌流法適用于動物實驗中對缺氧敏感的器官,如神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸等取材。
組織細(xì)胞固定液固定的方法
1.浸泡法
這是zui常用的固定法,將取好的組織直接浸泡在固定液中,固定的時間一般在2~24h它適用于動物標(biāo)本、尸檢標(biāo)本及臨床活檢標(biāo)本等。
2.蒸氣法
比較小而薄的標(biāo)本可用鋨酸或甲醛蒸氣固定。主要用于血液、細(xì)胞涂片以及某些薄膜組織的固定。具體方法:在一有蓋培養(yǎng)皿內(nèi)滴人1%一2%鋨酸水溶液3滴,將涂片放人其中,固定30s至lmin左右,立即水洗后進(jìn)行染色。
3.注射、灌注固定法
主要適用于動物實驗標(biāo)本的固定。將固定液注入血管,以達(dá)到充分的固定。經(jīng)血管分支到達(dá)整個組織或全身
(1)局部灌注固定 固定肺組織可將固定液從氣管或支氣管注入,注入速度不要太快,用力均勻,注入量適當(dāng),以免脹破肺泡。固定眼球組織可從眼后房注人固定液。固定肝、腎組織則可從肝、腎動脈注入固定液,同時切斷其靜脈使得血液排出。腦組織的固定,必須先麻醉動物,分離頸動脈,注射器的針尖向著頭部的方向注入固定液。
(2)全身灌注固定 較大的動物往往采取輸液方法,將固定液從一側(cè)頸總動脈或股動脈輸入,將另一側(cè)相應(yīng)的靜脈切開放血。固定液的輸入量因動物而異,兔、貓約500~1000ml,猴、狗約1000—2000ml。
4.微波固定法
近幾年來微波固定法一直可見報道。經(jīng)微波固定的組織具有收縮較小、核膜清晰、染色質(zhì)均勻、分辨清晰等特點,但必須嚴(yán)格控制微波固定的時間和溫度。